[简答题]经常采用的人工诱导多倍体形成的手段有哪些？

参考答案: 1、物理学方法
（1）温度休克法
冷休克法：其原理是低温能够阻止微管蛋白聚合成微管，从而阻止纺锤丝形成；纺锤丝被破坏以后细胞不能正常分裂，极体不能形成和排出，由此可获得二倍体的卵核，将其与单倍体的精子受精即可获得三倍体。温度休克可以在第一次减数分裂期间（目前的技术只适用于某些无脊椎动物）进行（抑制第一极体的排出），也可以在第二次减数分裂中进行（抑制第二次减数分裂）。无论抑制哪一个极体的排出，均需要准确的处理时间，也就是减数分裂的中期，纺锤丝形成前和形成期间进行温度处理才能保证效果。
热休克法：若正在进行减数分裂的卵细胞处于较高温度环境中，细胞内一些进行生命活动的重要酶类如ATP酶就会遭到破坏，从而使供能途径受阻，纺锤体不能形成，进而抑制了细胞的分裂，极体不能排放，形成二倍体的卵原核，与正常精子受精即形成多倍体。热休克处理的时间必须刚好在减数分裂的中期以前及中期分裂纺锤丝形成期间。
（2）静水压处理
将处于第一或第二成熟分裂期的鱼卵采用较高的水静压处理（大约为65Okgf/cm2），微管所保持的结构失去原有的空间构型和刚性，发生可逆性裂解，破坏纺锤丝的形成，从而破坏了细胞分裂，抑制了第一或第二极体的排出，导致二倍体卵子的形成，进而与正常精子受精得到三倍体；当水压力的变化发生在第一次卵裂时，由于破坏了二倍体体细胞的纺锤丝的形成，导致类似于核内有丝分裂的现象发生则可能产生四倍体的个体。
（3）电脉冲休克
在一定的电场条件下，细胞与细胞之间的膜会发生融合，导致两个细胞合二而一，从而诱发多倍体（四倍体）。
2、化学方法
（1）秋水仙素
是从百合科植物秋水仙的种子、鳞茎中提取的生物碱，能抑制微管的组装，使已有的微管解聚合，阻止纺锤体的形成或破坏已形成的纺锤体，从而导致核内有丝分裂形成多倍体细胞。在去除秋水仙素后，其作用立即结束，细胞恢复正常的生理状态。
（2）细胞松弛素
真菌的一类代谢产物，是水产动物育种中是最常用的一种化学诱导药物。CB特异性破坏微丝，最终导致控制细胞分裂的由微丝构成的收缩环的解体，抑制细胞质分裂，阻止极体的释放，从而产生多倍体。
（3）聚乙二醇
是一种常用的细胞融合剂，能使细胞发生融合，从而使染色体加倍。该药物被广泛用于试管内的细胞融合。由于其特殊的理化特性，也将其用于水产动物的多倍体诱导。
（4）6-二甲基氨基嘌呤
是嘌呤霉素的一种类似物，其生理作用是抑制蛋白质磷酸化，通过作用于特定的酶，破坏微管的聚合中心，使微管不能形成，从而破坏细胞分裂，抑制卵细胞极体的形成和释放。6-DMAP非致癌性，具水活性。洗除该药物后，受精卵可以正常发育。6-DMAP低毒、高效、价格便宜，在诱导多倍体方面表现出较大的优越性和较广阔的应用前景。
（5）咖啡因
进人细胞后可以立即提高细胞内的Ca2+浓度。由于微管对Ca2+浓度敏感，当Ca2+浓度极低或高于1mg/mL时，会引起微管二聚体的解聚，阻止细胞分裂，从而形成多倍体。
3、生物学方法
（1）远缘杂交
亲本配子染色体加倍可以使染色体达到平衡，从而克服远缘杂交的困难获得多倍体的杂交种。因此，远缘杂交可以产生异源多倍体。
（2）核移植及细胞融合
核移植诱导鱼类多倍体技术仍处于实验阶段，试管内的细胞融合可以产生多倍体细胞。
（3）四倍体与二倍体交配生产三倍体
目前对三倍体诱导的大量工作表明：很难有一种方法能产生100%的三倍体，且操作烦琐，每年进行诱导培育，使用昂贵的仪器，所用药品毒性大、价格昂贵，生产成本较高。