[简答题]分子标记是怎样逐步演化的？

参考答案: 分子标记是能够用来作为指纹鉴定或区分个体特点的DNA片段。这种标记在遗传学研究和生物技术应用方面具有非常重要的作用。分子标记的基础是个体间存在的自然遗传变异，进而造成许多遗传序列的多态性，即这些序列在不同的个体表现不同。分子标记就是通过查找和应用这种变异对个体、性状和基因在遗传差异的基础上进行鉴别。
（1）限制性片段长度多态性
这是发展最早的分子标记技术。其原理是检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位点发生变异的突变都可导致RFLP的产生。此技术包括以下基本步骤：
①DNA的提取和纯化；
②DNA的限制性内切酶酶切；
③用凝胶电泳将DNA片段分开；
④把DNA片段转移到滤膜上；
⑤利用放射性标记的探针与滤膜上的DNA片段进行杂交以显示特定的DNA片段，然后分析结果。
（2）随机扩增多态性DNA
该技术用随机引物非定点地扩增DNA片段，然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分开扩增片段。
其特点包括：
①不需DNA探针，设计引物也不需要预先知道序列信息；
②用一个引物就可扩增出许多片段，总的来说RAPD在检测多态性时是一种相当快速的方法；
③技术简单，RAPD分析不涉及分子杂交、放射自显影或其他技术；
④RAPD分析所需DNA样品量少；
⑤RPD分析中存在的最大问题是重复性不太高，因为在PCR反应中条件的变化会引起一些扩增产物的改变。
（3）扩增片段长度多态性
其特点是把RFLP和PCR结合了起来。其基本步骤是：把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增（在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”），用接头互补的但3/端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3/一端严格配对的片段才能得到扩增，再在有高分辨率的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染色法均可检测之。
（4）单核苷酸多态性技术
同一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。目前SNP作为一种新的分子标记，已 有2000多个标记定位于人类染色体上，在植物上也在进行开发研究。