[单选题]在线路允许速度120km/h<υmax≤160km/h正线上,调节器轨道静态几何不平顺容许偏差管理值中,三角坑的临时补修标准为()mm。
A.7
B.8
C.9
D.10

解答案: ( 1) N-末端测定法:常采用 2,4-二硝基氟苯法、 Edman 降解法、丹磺酰氯法。

①2,4-二硝基氟苯( DNFB 或 FDNB)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与 2,4-二硝 基氟苯( 2,4-DNFB) 反应( Sanger 反应) ,生成 DNP-多肽或 DNP-蛋白质。由于 DNFB 与氨 基形成的键对酸水解远比肽键稳定, 因此 DNP-多肽经酸水解后,只有 N-末端氨基酸为黄色 DNP ―氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。

②丹磺酰氯( DNS)法: 多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯( DNS-Cl)反 应生成 DNS-多肽或 DNS-蛋白质。由于 DNS 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此 DNS- 多肽经酸水解后,只有 N-末端氨基酸为强烈的荧光物质 DNS-氨基酸,其余的都是游离氨基

酸。

③苯异硫氰酸脂( PITC 或 Edman 降解)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异 硫氰酸苯酯( PITC) 反应( Edman 反应) ,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶 剂中加热时, N-末端的 PTC-氨基酸发生环化, 生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下 来,除去 N-末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。

④氨肽酶法:氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的 N 端逐个地向里切。 根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力 学曲线,就能知道该蛋白质的 N 端残基序列。

( 2) C-末端测定法:常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。

①肼解法: 蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解, 反应中除 C 端氨基酸以游离形式存 在外, 其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。

②还原法: 肽链 C 端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的 α-氨基醇。肽链完全水解后, 代表原来 C-末端氨基酸的 α-氨基醇, 可用层析法加以鉴别。

③羧肽酶法:是一类肽链外切酶,专一的从肽链的 C-末端开始逐个降解,释放出游离 的氨基酸。被释放的氨基酸数目与种类随反应时间而变化。根据释放的氨基酸量( 摩尔数) 与反应时间的关系, 便可以知道该肽链的 C-末端氨基酸序列。