[简答题]微量碱法分离纯化质粒DNA的原理及其主要步骤。

参考答案: 原理及其主要步骤：
①质粒DNA与染色体线性DNA在拓扑学上的差异：质粒DNA（cccDNA）是共价闭合双链超盘旋构型的小分子DNA，而细胞染色体DNA在细胞裂解分离过程中断裂成线性DNA（LDNA），虽然在化学本质上没有本质区别，但在高级结构拓扑学上存在差异。
②差异碱变性：在pH12.0-12.5高pH条件下，线性的DNA容易变性解链，而质粒DNA不易变性或很少变性。
③酸复性：在pH4.8条件下，cccDNA很快复性，而线性的染色体DNA不可逆的变性并与蛋白质、RNA形成沉淀物，通过离心可以把LDNA与cccDNA分开。cccDNA在上清液中。
④酒精沉淀cccDNA：以2.5倍的95%酒精沉淀质粒DNA，（浓度为66%沉淀最好）。保存在TE（pH8.0）缓冲液中，放置在-20℃下保存备用。