[简答题]影响孢子质量的因素及其控制有哪些？

参考答案: 影响孢子质量的因素及其控制：
（1）培养基：
①构成孢子培养基的原材料，其产地、品种、加工方法和用量对孢子质量都有一定的影响；
②琼脂的牌号不同，对孢子质量也有影响；
③水质的影响也不能忽视。为了避免水质波动对孢子质量的影响，可在蒸馏水或无盐水中加入适量的无机盐，供配制培养基使用；
④为了保证孢子培养基的质量，斜面培养基所使用的主要原材料，糖、氮、磷含量需经过化学分析及摇瓶发酵试验合格后才能使用。制备培养基时要严格控制灭菌后的培养基质量。斜面培养基使用前，需在适当温度下放置一定的时间，使斜面无冷凝水呈现，水分适中有利于孢子生长；
⑤配制孢子培养基还应考虑不同代谢类型的菌落对多种氨基酸的选择；
（2）培养温度和湿度：
①微生物能在一个较宽的温度范围内生长。但是，要获得高质量的孢子，其最适温度区间很狭窄。一般来说，提高培养温度，可使菌体代谢活动加快缩短培养时间。但是菌体的糖代谢和氮代谢和各种酶类，对温度的敏感性是不同的。因此，培养温度不同，菌的生理状态也不同，需经实践考查确定；
②斜面孢子培养时，培养室内的相对湿度对孢子形成的速度，数量和质量有很大影响。空气中相对温度高时，斜面内水分蒸发的慢，这时斜面孢子从上部往下长，下部常因积存冷凝水，致孢子生长的慢或不能生长。真菌对湿度要求偏高，而放线菌对湿度要求偏低。最适培养温度和湿度是相对的，例如相对湿度、培养基组分不同，对微生物的最适温度会有影响。培养温度、培养基组分不同也会影响到微生物培养的最适相对湿度；
（3）培养时间和冷藏时间：
①孢子的培养时间：孢子本身亦有年轻与衰老的区别。孢子培养工艺一般选择在孢子成熟阶段时终止培养，如果继续培养，则进入斜面衰老菌丝自溶阶段，孢子的培养时间对孢子质量有重要影响，过于年轻的孢子经不起冷藏；
②孢子的冷藏时间：斜面孢子的冷藏时间，对孢子质量也有影响，其影响随菌种不同而异，总的原则是冷藏时间宜短不宜长；
⑷接种量：制备孢子时的接种量要适中，接种量过大或过小均对孢子质量产生影响。因为接种量的大小影响到在一定量培养基中孢子的个体数量的多少，进而影响到菌体的生理状态。接种量过小则斜面上长出的菌落稀疏，接种量过大则斜面上菌落密集一片。一般传代用的斜面孢子要求菌落分布较稀，适于挑选单个菌落进行传代培养。接种摇瓶或进罐的斜面孢子，要求菌落密度适中或稍密，孢子数达到要求标准。一般一支高度为20cm、直径为3cm的试管斜面，丝状菌孢子数要求达到107以上。接入种子罐的孢子接种量对发酵生产也有影响。孢子数量过少，则进罐后生长出的球状体过大，影响勇气效果；若孢子数量过多，则进罐后不能很好地维持球状体。除了以上几个因素需加以控制之外，要获得高质量的孢子，还需要对菌种质量加以控制。用各处方法保存的菌种每过1年都就进行1次自然分离，从中选出形态、生产性能好的单菌落接种孢子培养基。制备好的斜面孢子，要经过摇瓶发酵试验，合格后才能用于发酵生产。