[简答题]试述探针的种类及其制备。

参考答案:根据核酸分子探针的来源和性质，可以分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核苷酸探针。
(1)基因组DNA探针：从基因组文库中筛选得到一个特定基因(或基因片段)的克隆后，大量扩增、纯化，即可作为探针使用，但这些片段可能含有内含子序列。
(2)cDNA探针：由于cDNA中不存在内含子及其他高度重复序列，因此是一种较为理想的核酸探针。以mRNA为模板，在逆转录酶作用下，合成cDNA后，将其克隆于适当的载体上，通过扩增重组质粒而使cDNA得到大量扩增。制备质粒后，用限制酶切割重组质粒，将cDNA片段切割下来。分离纯化，即可作为探针使用。
(3)RNA探针：将目的基因克隆到带有SP₆或T₇启动子的质粒中，插入到启动子下游。再用适当的限制酶在插入序列的下游切断质粒，使其线性化，加入RNA聚合酶、4种NTP，其中一种为α-³²P标记的NTP。以目的基因的DNA为模板，体外转录出高放射性活性的RNA探针。
(4)寡核苷酸探针：根据已知的核苷酸序列，采用DNA合成仪合成一定长度的寡核苷酸片段，亦可作为探针使用。若核苷酸序列未知，可根据蛋白质的氨基酸序列推导出核苷酸顺序，合成相应的寡核苷酸片段作为探针。寡核苷酸片段长度大多在15～30个核苷酸之间。