[简答题]试述PCR的主要类型及其原理。

参考答案:PCR的主要类型包括：(1)反向PCR；(2)不对称PCR；(3)RT-PCR；(4)重组PCR(PCR体外诱变技术)；(5)简并引物PCR；(6)定量PCR；(7)多重PCR；(8)锚定PCR；(9)原位PCR；(10)差异显示PCR；(11)巢式PCR；(12)共享引物PCR。
原理：(1)反向PCR：用于未知DNA片段的扩增。先用连接酶将片段连接成环状，根据已知序列的碱基序列设计3’引物和5’引物扩增未知序列。
(2)不对称PCR：原理是两端引物的浓度相差50～100倍，经PCR扩增得到单链DNA。在PCR前25个循环中，主要生成双链产物，低浓度引物耗尽时，高浓度引物介导的PCR反应可产生大量单链DNA。
(3)RT-PCR：先将mRNA逆转录成cDNA，接着以cDNA为模板进行PCR扩增。合成cDNA第一链时，常用多聚(dT)引物进行。后面的PCR扩增与普通PCR相同。
(4)重组PCR：利用寡核苷酸引物在碱基不完全互补配对的情况下亦能同模板DNA退火的能力，设计引物时，人为地造成碱基取代、缺失或插入，从而通过PCR反应将突变引入靶DNA区段。
(5)简并引物PCR：引物在未知DNA片段确切核苷酸序列的情况下，设计简并引物，从基因组(或cDNA)中把未知基因扩增出来。
(6)定量PCR：以mRNA为模板合成cDNA后，再在同一反应管内同时加入参照基因和待测基因。参照引物和待测基因引物进行PCR扩增，以参照基因扩增产物为基础，确定待测基因的相对量。
(7)多重PCR：同一体系中加入多对引物，扩增同一模板的几个区域。
(8)锚定PCR：通过DNA末端转移酶在cDNA 3’末端加上poly(dG)尾，设计相对应的锚定引物poly(dG)，在锚定引物和基因特异引物作用下，扩增全序列的DNA片段。
(9)原位PCR：以组织固定处理细胞内的核酸作为靶序列，进行PCR反应。不必从组织细胞中分离模板DNA或RNA。
(10)差异显示PCR：将两种mRNA的样品逆转录成cDNA第一链，后加入两种引物进行PCR扩增，一种为锚定引物，另一种为十碱基的随机引物。PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳比较，寻找PCR产物的差异片段，可能是差异表达的基因片段。
(11)巢式PCR：一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用内侧引物以大片段为模板扩增目的基因，特异性更高。
(12)共享引物PCR：利用3条引物来扩增两种不同的DNA序列。其中一条引物与两种DNA序列都互补，这条引物与另外两条引物分别组成两对PCR引物。