[简答题]试述细胞分选的原理及其技术要求有哪些?

参考答案: (1)细胞分选的原理：当细胞悬液形成液流柱流经流动室，流动室上方的压电晶体产生机械振动带动流动室以相同频率进行振动，使液流柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成速率约每秒3万个，其中仅少数液滴含有细胞，大量为不含细胞的空白液滴。当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会充电，带有正或负电荷，未设分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。带电液滴在落入电极偏转极的高压静电场，依所带电荷是正或负而发生向右或左道偏转，落入指定收集器中完成分选。
(2)技术要求：①分选速度，一般要求分选速度达5000个/秒左右，以保证被分选细胞的生物活性不受影响。分选速度与仪器性能有关，与细胞悬液中被分选细胞含量呈正相关。分选速度的要求应按细胞的特性决定，如培养细胞因其膜脆弱，不宜选择高速；而骨髓来源的细胞因所占比例不变，宜选高速。②分选纯度，与仪器精密度及被选细胞与其他细胞有无重叠特性相关，也与实验设计的选择密切相关。③分选收获率，即通过测量点的分选细胞与实际收获的分选细胞的比例，同样与不选细胞有否重叠相关。收获率与纯度有对应关系：要求纯度高，收获率相对低；要求收获率高，则纯度相对降低。实际工作中，应在不影响纯度的情况下，获得最高收获率。④分选得率，是指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。得率与分选速度相关，分选速度过高，会有部分目的细胞漏检，得率下降；分选速度降低，得率增加。