[简答题]试述核移植的方法

参考答案: （1）核供体细胞的制备：受精后已发育到高囊胚或低囊胚的鱼卵去膜后，置于底部涂有琼脂，并盛有Holtfreter氏液的培育皿中，置于解剖显微镜下，用玻璃针/发圈切下位于动物性极的囊胚细胞团，这些细胞在2－3分钟内能分散成游离细胞。如果细胞暂时分不开，可用一支细吸管吸水后轻轻冲击它们，以帮助细胞分离。
（2）受体细胞的制备：移核前，鱼卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不锈钢镊子在解剖镜下剥开卵膜，游离出卵子。剥膜应于排卵后2－3分钟，在盛有消毒水的培育皿中进行。剥粘性卵时，一般只需一手持镊，用镊尖夹住卵膜的一处，迅速把膜撕裂，裂口越大越好；剥浮性卵时，卵膜吸水后膨胀，卵周隙很大，所以可用双手持镊，同时夹住卵膜上的一处，迅速把卵膜向外撕裂。
（3）移核：将分离的的囊胚细胞立即用吸管移至盛有去核卵的培育皿中内备用。移核时，把盛有去核卵和分离细胞的培养皿置于解剖显微镜下，用发圈将它们拨到视野内，然后将操纵台移近解剖显微镜的一侧，调节移动上的位移旋钮和微型吸管的角度，使之对准分离的囊胚细胞，轻轻向后旋动注射器上的微分筒，该细胞随培养液被吸入管内破裂，但细胞质不能分散，应仍紧包围着其中的细胞核，否则细胞核直接与液体接触会受损伤。细胞被吸入管内的位置，以刚进行管口一小段距离为宜，以免将它注入卵时带入过多的培养液。
（4）核质杂种的培养：鱼类核移植杂种细胞由于卵外胶膜被破坏，需在等渗的Holtfreter液中培养一段时间，然后逐渐转入低渗溶液，早期胚胎发育过后可入曝气水中培养。