参考答案:B
15.答:种核苷酸带电荷情况:
pH2.5
pH3.5
pH6
pH8
pH11.4
UMP
负电荷最多
-1
-1.5
-2
-3
GMP
负电荷较多
-0.95
-1.5
-2
-3
AMP
负电荷较少
-0.46
-1.5
-2
-2
CMP
带正电荷
-0.16
-1.5
-2
-2
(1)电泳分离四种核苷酸时应取pH3.5 的缓冲液,在该pH值时,这四种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但移动的速度不同,依次为:
UMP>GMP>AMP>CMP
(2)应取pH8.0,这样可使核苷酸带较多负电荷,利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然pH11.4时核苷酸带有更多的负电荷,但pH过稿对树脂不利。
(3)洗脱液应调到pH2.5。当不考虑树脂的非极性吸附时洗脱顺序为CMP>AMP>UMP>GMP(根据pH2.5时核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度),但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为:CMP>AMP>UMP>GMP。
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